DNA甲基化检测

DNA 甲基化是表观遗传学的重要修饰方式：在 DNA 甲基转移酶（DNMTs）催化作用下，以 S-腺苷甲硫氨酸（SAM）作为甲基供体，将甲基基团添加至胞嘧啶第 5 位碳原子，生成 5-甲基胞嘧啶（5-mC）。该修饰不改变 DNA 一级序列，却能够调控基因转录与表达，广泛应用于肿瘤机制研究、疾病标志物筛选、发育生物学、药物表观机制等科研方向。

DNA 甲基化检测是表观遗传研究的核心技术，可精准解析目标基因区域胞嘧啶位点的甲基化修饰状态。丰晖生物提供 MSP（甲基化特异性 PCR）与 BSP（亚硫酸氢盐克隆测序）两种主流检测方案，满足不同科研需求。

亚硫酸氢盐转化是两种方法共同的基础反应：基因组 DNA 经亚硫酸氢盐处理后，未发生甲基化的胞嘧啶（C）脱氨转变为尿嘧啶（U），而发生甲基化修饰的 5-甲基胞嘧啶（5-mC）保持不变。转化后的序列差异再经不同策略区分，即形成 MSP 与 BSP 两种检测方案。

图1 亚硫酸氢盐转化与 DNA 甲基化检测原理示意图

MSP：甲基化特异性 PCR

针对亚硫酸氢盐转化后的甲基化模板与非甲基化模板分别设计特异性引物，开展 PCR 扩增：

• 若甲基化引物可扩增出目的条带，代表该检测位点存在甲基化修饰
• 若无扩增产物，则提示该位点无甲基化
• PCR 产物经琼脂糖凝胶电泳，即可直观判断位点甲基化情况，适合位点的快速定性筛查

BSP：亚硫酸氢盐克隆测序

基因组 DNA 完成亚硫酸氢盐转化后，设计 BSP 通用引物进行 PCR 扩增，扩增过程中尿嘧啶转变为胸腺嘧啶；将 PCR 产物构建 TA 克隆，挑选多个单克隆进行 Sanger 测序，通过测序结果逐一比对，定量统计每个 CpG 位点的甲基化比例，可实现甲基化水平的定量分析。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为 BSP 亚硫酸氢盐克隆测序的典型结果示例。点状图是展示甲基化的经典方法：白色空心点表示未发生甲基化的 CG 位点，黑色实心点表示发生甲基化的 CG 位点。

以下要点直接影响甲基化检测结果的准确性，请重点关注：

DNA 甲基化研究常需配套的核酸与表观遗传检测。以下服务可组合开展：