慢病毒 / 转座子法将目的基因整合至宿主基因组，药物筛选获得稳定高表达稳株
过表达稳株是将外源目的基因整合至宿主细胞基因组，可长期稳定高水平表达靶基因的细胞系，多用于基因功能研究、蛋白制备及药物筛选。
构建方式主要有质粒转染、转座子介导、慢病毒感染三类：质粒转染法操作简易、成本较低；转座子法依靠转座酶介导基因高效整合，适用于长片段基因的稳株构建；慢病毒感染法感染效率高、筛选周期短，是构建稳株的主要方法。
丰晖生物提供一站式过表达稳株构建服务：从载体构建、病毒感染 / 转染、药物筛选、单克隆分离到 qPCR 与 Western blot 验证全流程标准化操作，原始数据与完整实验报告同步交付。
核心应用场景：
提示：稳株构建环节较多，建议在方案阶段明确是否需要蛋白层面保障：基因保障型通过 qPCR 验证过表达效果，蛋白保障型将目的基因与外源标签融合，通过 Western blot 检测标签蛋白，更适合后续蛋白实验。
过表达稳株通过将外源基因整合至宿主细胞基因组，使目的基因随细胞基因组同步复制并持续转录翻译，从而实现长期稳定表达。常用构建方式包括慢病毒法、转座子法与质粒转染法。
慢病毒感染靶细胞后，病毒单链 RNA 基因组释放至细胞质，在自身反转录酶催化下反转录为双链 DNA；依靠载体 cPPT 元件介导高效入核，随后在病毒整合酶作用下随机插入宿主细胞染色体基因组，实现基因稳定整合。
整合在宿主基因组中的外源基因可随细胞基因组同步复制，由载体内部启动子持续转录生成 mRNA，mRNA 转运至细胞质完成翻译，稳定表达目标蛋白。载体携带药物抗性筛选标记，经药物加压筛选、单克隆分离扩增后，可获得能够长期传代、稳定表达目的基因的细胞株。
图1 慢病毒法构建稳株示意图
转座子系统由转座子载体和转座酶表达质粒两部分组成。转座子载体两端携带反向末端重复序列（ITR），中间插入目的基因与筛选标记；共转染细胞后，转座酶质粒表达转座酶蛋白，特异性识别载体两侧 ITR 序列，切割携带目的基因的外源 DNA 片段并整合到宿主细胞染色体基因组上。
外源基因随宿主基因组同步复制，借助载体上的抗性标记，通过药物筛选和单克隆分离即可获得长期稳定表达目的蛋白的稳转细胞株。常用转座子系统有 PiggyBac、Sleeping Beauty 等。
图2 转座子构建稳株示意图
千余种不同种属细胞系与原代细胞一站式可选
细胞 / 分子 / 病毒平台配套，个性化实验方案专属定制
自建功能性稳株细胞库持续扩充，现货即用
包装滴度高、易转导，实验数据稳定可靠
基因保障型以 qPCR 验证，蛋白保障型以 WB 验证标签蛋白
获取目的基因序列，构建含目的基因与筛选标记的表达载体
慢病毒法包装病毒并测定滴度；转座子法准备转座子载体与转座酶质粒
按选定方法感染靶细胞或共转染两种质粒，确认导入效率
使用相应抗性药物加压筛选，获得稳定整合的混合细胞群
有限稀释铺板分离单克隆，扩增后获得纯一的稳转细胞株
qPCR 或 Western blot 验证过表达效果，完成质检后冻存交付
下表为本项服务的常规工作环节与说明。细胞与方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 细胞准备与载体构建 | 细胞状态确认，目的基因获取与表达载体构建 |
| 病毒包装 / 转座酶质粒准备 | 慢病毒滴度测定，或转座子载体与转座酶质粒准备 |
| 感染或共转染 | 按方案完成病毒感染或共转染，确认导入效率 |
| 药物筛选与单克隆分离 | 抗性加压筛选、有限稀释铺板与单克隆扩增 |
| 表达验证与交付 | qPCR 或 Western blot 验证，质检合格后冻存交付 |
基因保障型在基因层面通过 qPCR 保障过表达效果；蛋白保障型将目的基因与外源标签（如 Flag）融合，通过 Western blot 检测标签蛋白的过表达效果，更适合后续蛋白层面实验。
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 过表达稳株（含 qPCR 检测） | 亲本株 + 目的株（1×10⁶）、细胞出库图、支原体检测报告、本底检测报告（qPCR）、载体构建报告、过表达验证报告（qPCR） |
| 蛋白保障型过表达稳株（含 qPCR + WB 检测） | 亲本株 + 目的株（1×10⁶）、细胞出库图、支原体检测报告、本底检测报告（qPCR）、载体构建报告、过表达验证报告（qPCR + WB） |
| 过表达 NC 稳株（配套空载体对照） | NC 株（1×10⁶）、细胞出库图、支原体检测报告、过表达验证报告（qPCR）；NC 稳株为空载体对照稳转株，需与目的稳株配套下单 |
| 亲本株与目的株 | 均以冻存形式交付，数量 1×10⁶，用于对照与后续实验 |
| 细胞出库图与质检报告 | 含细胞出库图、支原体检测报告与细胞说明书 |
以下为已交付的过表达稳株典型结果示例。
结果呈现说明：基因保障型以 qPCR 检测目的基因相对表达量，比较目的株与亲本株的表达差异；蛋白保障型另以 Western blot 检测标签蛋白条带与灰度，评价蛋白层面的过表达效果。
慢病毒感染效率高、筛选周期短，适配多数细胞类型，是常规首选；转座子法依靠转座酶介导基因高效整合，更适合长片段基因的稳株构建。具体方式会结合目的基因大小与细胞类型确定。
基因保障型在基因层面通过 qPCR 保障过表达效果；蛋白保障型在蛋白层面保障外源蛋白的过表达效果，通常将目的基因与外源蛋白标签（如 Flag）融合，再通过 Western blot 检测标签蛋白。
可以。也可由公司免费提供细胞系或按需从细胞库采购。客户提供细胞时需同时提供细胞说明书、培养条件、鉴定报告与支原体阴性报告，我方会先培养检测再开展实验。
默认提供非融合的绿色荧光表达与嘌呤霉素筛选抗性，也可根据需求定制其他荧光标签与筛选抗性。
NC 稳株为空载体对照稳转株，用于排除空载体本身对细胞的影响，需与目的稳株配套下单；若已有合适的对照株，可与技术团队沟通。
基因保障型通过 qPCR 检测目的基因相对表达量；蛋白保障型在此基础上增加 Western blot 检测标签蛋白条带与灰度，评价蛋白层面的过表达效果。
具体周期视细胞类型、构建方式与筛选难度而定，方案确认后我们会给出明确的时间安排。
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