双荧光素酶检测

双荧光素酶报告基因检测是以荧光素（luciferin）为底物，检测萤火虫/海肾荧光素酶（luciferase）活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化 luciferin 氧化从而发出生物荧光（bioluminescence），并通过荧光检测设备测定。

该系统将感兴趣的受调控元件（如启动子、UTR）构建在荧光素酶基因的上游或下游，与调控元件（如转录因子、miRNA）共转染细胞后测定荧光素酶活性，通过活性高低判断调控元件的调控作用。

丰晖生物提供一站式双荧光素酶检测服务，从实验设计、载体构建、细胞转染到双荧光素酶检测与数据分析全程标准化操作，原始数据与完整报告同步交付。

双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶，其中一种作为内参为实验提供基准线，实验报告基因经过内参的处理可以减小细胞活性和转染效率对实验的影响。

萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶没有种源同源性，且对应不同的反应底物，反应中没有任何交叉干扰。因此可以把感兴趣的受调控元件（如启动子、UTR）构建在荧光素酶基因（Fluc/Rluc）的上游或下游，构建成荧光素酶报告质粒；构建完成后与调控元件（如转录因子、miRNA）共转染细胞，再测定荧光素酶活性，通过活性的高低判断调控元件的调控活性。

图1 双荧光素酶检测原理示意图

双报告系统的校正逻辑

实验中通常以萤火虫荧光素酶（Fluc）作为报告基因、海肾荧光素酶（Rluc）作为内参基因。由于两种酶使用不同底物、发光可顺序测定且互不干扰，最终以 Fluc 与 Rluc 的活性比值评价调控作用，可有效扣除转染效率与细胞状态差异的影响。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为双荧光素酶实验验证转录因子对靶启动子活性的典型结果示例。

图一 双荧光素酶实验验证转录因子对 HMGB1 启动子活性的影响

双荧光素酶实验的设计与样品状态直接影响结果可靠性，请注意以下要点：

双荧光素酶检测常与其他基因表达与调控研究手段配合。以下服务可组合开展：