成球实验

成球实验（sphere formation assay）是肿瘤干细胞体外鉴定的重要功能学方法，用于评价单个细胞在适宜条件培养基中自我更新的能力，通常以细胞球形成效率表示。肿瘤干细胞对肿瘤的存活、增殖、转移及复发具有重要意义：一方面通过自我更新与无限增殖维持肿瘤细胞群的生命力，另一方面其迁移与侵袭能力使肿瘤转移成为可能。

肿瘤干细胞球培养是体外富集肿瘤干细胞的经典方法：将肿瘤单细胞置于低黏附、无血清且添加生长因子的培养体系中，具备干性的细胞可存活、增殖并自发聚集形成球状细胞团。该三维结构具有活体肿瘤组织的诸多特点，包括细胞紧密排布、内部缺氧微环境与细胞异质性。

丰晖生物提供一站式成球实验服务，从细胞准备、条件培养基配制、接种培养到球体计数与统计分析全程标准化操作，原始图片与完整报告同步交付。

成球实验的核心在于构建一个抑制贴壁、抑制分化的培养环境：使用低黏附培养板配合无血清培养基（添加 EGF、bFGF、B27 等生长因子与添加剂），使细胞无法贴壁伸展。

在此条件下，普通肿瘤细胞因缺乏存活信号与贴壁依赖而逐渐凋亡，而具备干性（自我更新与多向分化潜能）的细胞可存活并增殖，单个细胞通过增殖与自发聚集形成三维细胞球。因此细胞球形成能力可直接反映细胞的干性水平。

原代成球与传代成球的区别

原代成球常用较低接种密度，用于从混合细胞群中富集具有干性的细胞；传代成球则将原代细胞球消化为单细胞后重新接种，用于扩增细胞球并验证自我更新能力。若研究目的是验证自我更新能力，应至少完成 2–3 次连续传代成球。

球体计数的判读标准

一般将直径 ≥50 μm 且具三维立体结构的细胞团计为细胞球，避免把几个细胞形成的松散聚集物计入。细胞球直径超过约 200–300 μm 时，内部易因营养与氧气渗透不足形成坏死核心，此时应缩短培养周期或降低接种密度。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为 HCT116 细胞成球实验的典型结果示例。

图一 成球实验结果展示（对照 Spheres 与 PER3-siRNA 干扰组细胞球对比）

成球实验常与其他干性鉴定与表型检测联合开展。以下服务可组合：