基因亚克隆

基因亚克隆是把一段目的基因从已有重组载体（母质粒）切下，重新插入另一个新载体（表达 / 测序 / 标签质粒）的分子克隆技术，多用于更换载体以实现蛋白表达、标签添加、基因分段功能验证等分子研究。

丰晖生物提供一站式基因亚克隆服务，覆盖载体与酶切位点设计、目的基因与线性化载体获取、重组连接、转化筛选与测序验证等环节，全流程标准化操作，原始数据与完整报告同时交付，确保数据真实可靠。

基因亚克隆的常规流程为：获取目的基因 → 获取线性化载体 → 基因重组 → 转化筛选。从已有载体上获取目的基因及线性化载体，通常有两种方法：限制性核酸内切酶酶切与 PCR 扩增。

限制性核酸内切酶能识别并切割 DNA 上的特定序列（如 GAATTC），利用目的基因两侧特有的酶切位点切断双链，释放带有粘性末端或平末端的基因片段；同理，在目的载体的克隆位点酶切可将环状质粒切开成线性分子。若后续使用 DNA 连接酶重组，酶切后的目的基因与载体须具有相同的末端。

PCR 扩增法可在引物 5' 端任意添加同源臂或引入突变：若做传统的酶切酶连，可在引物 5' 端添加酶切位点序列及保护碱基；若做同源重组，PCR 产物与线性载体的末端须为平末端或带同源臂，再依靠重组酶完成连接。

酶切法与 PCR 法如何选择

两种方式各有取舍：酶切法要求目的基因内部不含所选内切酶的识别序列，但酶切本身通常不引入突变；PCR 法不受序列限制且可人为设计末端，但扩增过程中存在碱基错配风险。实务中常依据序列特点与载体结构组合使用。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、片段长度与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为基因亚克隆并构建表达载体的典型结果示例。

图一 将 FASN（NM_004104）基因构建于 pcDNA3.1-3xFlag-C 载体

为便于后续质粒抽提与实验使用，请注意以下事项：

基因亚克隆常作为分子构建的中间环节。以下服务可组合开展：