Flow Cytometry Service

流式检测服务

单细胞多参数高通量分析,覆盖周期、凋亡、表面与胞内标志物、ROS 等指标,配色到分析一站式

单细胞多参数
高通量分析
细胞亚群鉴定
一站式服务

流式细胞术依托流式细胞仪实现单细胞多参数高通量分析,可检测细胞周期、凋亡、细胞表面与胞内标志物、活性氧等指标。服务涵盖样本前处理、荧光染色、上机检测与数据分析,广泛用于免疫、肿瘤、药理等细胞生物学研究。

丰晖生物流式平台可承接从动物建模(或细胞培养及建模)→ 抗体配色 → 样本前处理 → 上机检测 → 数据分析的一站式流式检测服务。

可提供的检测项目:

1. 线粒体膜电位检测(JC-1)

2. 细胞表面因子检测

3. 淋巴细胞亚群(T / B / NK)检测

4. T 细胞亚群检测

5. MDSCs 分型检测

6. 原代细胞鉴定

7. 干细胞鉴定

8. 单核细胞检测

9. DC 细胞检测

10. 粒细胞检测

11. 胞内或核内抗原检测

12. 巨噬细胞分型(M1 / M2)检测

13. 辅助性 T 细胞亚群(Th1 / Th2 / Th17)检测

14. 核内因子(含 Treg、Tfh、Tfr 等)检测

15. 可溶性蛋白质分子检测(如血清 / 细胞上清中的 Th 细胞因子、炎性因子与抗病毒因子等)

提示:若您尚未确定抗体配色方案,可先提供实验目的与目标细胞群体,我们会出具建议配色表(含荧光通道、抗体克隆号与对照设置),确认后再进入正式检测,避免因通道冲突导致实验返工。

流式细胞术是一项通过光电系统记录散射光信号与荧光信号,从而快速检测分析单细胞多物理特性的技术。样本经流体动力学聚焦后形成单细胞流,逐个通过激光照射区:细胞产生的前向散射光(FSC)反映细胞大小,侧向散射光(SSC)反映细胞内部颗粒度与复杂程度,荧光信号则反映标记分子的表达水平。

仪器将这些光信号转换为电信号并进行处理,从而实现细胞的定量分析与分选。流式细胞术广泛应用于基础生命科学与临床诊断,包括分析细胞表面与胞内分子的表达、鉴定异质细胞群、通过多重标记确定不同细胞亚群的比例,以及判断细胞状态、功能水平或进行细胞周期分析等。

图1 流式细胞术检测原理示意图

为什么抗体配色如此关键?

多色流式检测中,不同荧光素的发射光谱存在重叠(光谱溢漏),必须通过补偿调节校正。若荧光通道搭配不当,或目标分子表达量差异过大(强信号与弱信号共用相近通道),会导致补偿无法完全校正、弱信号群体被淹没。因此配色方案需在实验前完成设计,并在上机时用单染管逐通道确定补偿矩阵。

为什么必须设置多种对照?

流式检测至少需要三类对照:未染色对照(调节电压、确定阴性群体位置)、单染对照(计算补偿矩阵)、同型或 FMO 对照(排除非特异性结合与背景荧光)。缺少对照会使门控位置主观化,结果难以复现。

🎯

高品质方案设计

团队可根据不同样本类型提供最优样本处理方案与流式配色方案

🔬

服务链条完整

提供从细胞悬液制备、流式检测到数据分析与统计的一站式服务;除细胞功能检测外,也可提供多重染色标记服务

⚡

高性价比

凭借多年流式检测经验,为客户提供高性价比的流式检测服务

📊

全流程可承接

可承接从动物建模、细胞培养建模到抗体配色、上机检测与数据分析的全链条工作

1

实验方案与配色设计

明确目标细胞群体与检测指标,输出抗体配色表与对照设置方案,经确认后执行

2

样本前处理

制备细胞悬液(或组织研磨、裂解红细胞、密度梯度分离等);必要时进行刺激、固定与透膜处理

3

荧光染色

按配色方案加入抗体避光孵育,随后洗涤去除游离抗体

4

上机检测

逐通道调节补偿,设置门控策略,采集各样本荧光信号并做质控

5

数据分析与报告

分析细胞亚群比例、表达强度与统计学检验,出具完整报告

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后,我们会给出明确的时间安排。

服务内容工作说明
方案与配色设计输出配色表与对照设置方案
样本前处理与荧光染色含固定、透膜等处理
上机检测含补偿调节与上机质控
数据分析与报告出具亚群分析与统计学检验

需要多批次连续检测(如时间点实验)时,建议一次性规划样本批次,统一配色与门控策略,保证数据可比。

交付内容说明
原始流式数据(FCS)全部样本原始事件数据,可导入 FlowJo 等软件自行复分析
亚群分析结果图各样本散点图、直方图与门控策略图
定量数据与统计各细胞亚群比例、平均荧光强度(MFI)及组间统计学检验结果
完整实验报告实验步骤、抗体信息(克隆号 / 厂家 / 荧光素)、仪器设置与门控策略

以下为流式检测的典型结果示例,涵盖多色标记与细胞亚群分析。

结果呈现说明:报告提供各样本的散点图与直方图、门控策略说明,以及各细胞亚群比例与平均荧光强度的定量数据与组间统计学检验结果。

不同样本类型的处理与运输要求不同,请按下表准备。表中细胞量均为最低要求,建议适当增加以保证复孔与重复检测。

样本类型送样要求与运输条件
活细胞(贴壁 / 悬浮)冻存株:冷冻储存运输(干冰);T25 培养瓶:充液法常温运输
细胞周期样本用 75% 预冷乙醇重悬细胞(细胞量 ≥1×10⁶),低温运输。4 ℃ 可存放约一周,-20 ℃ 可存放约一个月;若短时间内不检测,建议保证冰乙醇最终浓度约 50%,避免样品黏度过高影响后续实验结果
凋亡检测样本使用试剂盒自带的 Binding Buffer(结合缓冲液)重悬(细胞量 ≥1×10⁵),4 ℃ 运输
ROS / JC-1 检测样本使用 4 ℃ 预冷 PBS 或无血清培养基重悬(细胞量 ≥1×10⁶),4 ℃ 运输
组织样本将新鲜组织置于预冷 PBS 中,4 ℃ 运输至实验室。若样品本身带荧光,请提前告知
血液样本抗凝全血(多采用 EDTA 抗凝),采集后室温保存,尽量 2 h 内送达实验室

其他注意事项:① 所有样本请附分组信息与处理条件(药物、浓度、作用时间);② 样本管上请标明组别与编号,避免混淆;③ 如需我方协助设计配色或前处理方案,请在送样前与我们确认。

Q需要自己准备抗体吗?

不需要。我们有常规流式抗体库,可覆盖列表中大部分检测项目;若涉及特殊标志物,我们会协助确认克隆号与荧光素并统一配置。

Q配色方案怎么确定?

我们会根据您的目标细胞群体与检测指标出具建议配色表(含荧光通道、抗体克隆号与对照设置),您在方案确认阶段审阅即可,避免通道冲突导致返工。

Q可以承接从动物实验开始的全流程吗?

可以。平台可承接从动物建模(或细胞培养及建模)→ 抗体配色 → 样本前处理 → 上机检测 → 数据分析的一站式服务。

Q为什么检测时必须做补偿调节?

多色检测中各荧光素的发射光谱存在重叠,若不进行补偿校正,会出现明显的假阳性或假阴性群体。我们使用单染管逐通道建立补偿矩阵,确保各通道信号准确区分。

Q每个样本需要多少细胞?

常规流式检测建议每个样本 ≥1×10⁶ 个细胞;周期检测与凋亡检测的最低要求见上方送样要求表。细胞量有限时请提前沟通。

Q检测周期多长?

具体周期包含方案设计、前处理、上机与数据分析;若包含动物建模或细胞造模,需另行评估。方案确认时我们会给出明确的时间安排。

需要流式检测服务?

告知检测指标与样本类型,我们设计配色与圈门策略,交付亚群比例、原始数据与可直接出图的图表

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