以特异性抗体捕获蛋白复合物，在天然状态下验证蛋白间相互作用
免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）以抗体与抗原之间的专一性结合为基础，是研究蛋白间相互作用的经典方法，主要用于确定两种蛋白质在完整细胞内是否发生生理性相互作用，也常被用于鉴定特定蛋白复合物中的未知组分。
丰晖生物提供一站式 CO-IP 检测服务：采用温和裂解体系保留细胞内天然蛋白互作，配合预实验与正式实验双重质检，并将原始数据、原始图片与剩余物料一并交付，支持结果二次验证。
核心应用场景：
提示：Co-IP 证明的是细胞内存在的相互作用，无法区分直接互作与间接互作（由第三种蛋白介导）。若需判断是否为直接结合，建议结合 GST pull-down 等体外方法验证。
免疫共沉淀的核心原理是利用抗原-抗体的特异性结合以及细菌 Protein G / A 能特异性结合免疫球蛋白 Fc 片段的特性。
第一步 — 温和裂解保留互作：细胞在非变性条件下裂解，采用 NP-40 或 Triton X-100 等非离子变性剂，完整保留细胞内的蛋白质-蛋白质相互作用。
第二步 — 抗体捕获蛋白复合物：加入目标蛋白（诱饵蛋白 X）的特异性抗体，与裂解液中的蛋白复合物孵育。若细胞内存在 X-Y 蛋白复合物，抗体将 X 连同与之结合的 Y 一起捕获。
第三步 — Protein G / A 磁珠沉淀：加入与抗体 Fc 片段特异性结合的 Protein G 或 A 磁珠，形成「目的蛋白 Y—诱饵蛋白 X—抗 X 抗体—Protein G / A 磁珠」复合物，经洗涤纯化后通过 Western Blot 检测是否存在蛋白 Y。
图1 CO-IP 实验原理示意图
判读时以 IP 组出现特异性条带说明两蛋白存在相互作用，以阴性对照（同种属 IgG）组无条带排除非特异性结合；同时应借助分子量 Marker 定位，确认条带位于目的蛋白的预期分子量处，并建议设置阳性对照验证实验体系可靠。
深耕蛋白互作检测领域，精通 Co-IP 方案设计与结果判定
采用非离子变性剂裂解，保留天然构象下的蛋白互作关系
预实验验证抗体有效性，正式实验严格设置对照
原始数据、原始图片与剩余物料返还，支持二次验证
IP 产物可继续用于蛋白质谱鉴定或 Western Blot 验证
收取细胞或组织，在非变性条件下温和裂解，全程加入蛋白酶抑制剂
裂解液中加入目标蛋白特异性抗体，与蛋白复合物共孵育
加入 Protein G 或 A 磁珠捕获抗体-抗原复合物，形成沉淀
多次洗涤去除非特异性结合蛋白，洗脱收集蛋白复合物
洗脱产物经电泳分离后转膜，用抗体检测是否存在目标互作蛋白
结合 Marker 定位与阴阳性对照判读结果，出具完整报告
下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、抗体与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 样品准备与裂解 | 细胞或组织裂解，采用温和裂解体系并加入蛋白酶抑制剂 |
| 抗体预实验 | 验证 IP 抗体的有效性与最佳用量，确认无非特异性结合 |
| 免疫沉淀 | 抗体与目标蛋白复合物孵育后，用 Protein G / A 磁珠捕获 |
| 洗涤、洗脱与检测 | 洗涤去除杂蛋白，洗脱后进行 SDS-PAGE 与 Western Blot 检测 |
| 数据分析与报告 | 结合对照判读互作结果，出具原始数据、图片与完整报告 |
若需鉴定复合物中的未知组分，可在 IP 产物上衔接蛋白质谱分析；原始数据、原始图片与剩余物料一并返还，支持二次验证。
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 原始数据与原始图片 | 未裁剪的 Western Blot 原图与化学发光图像，含分子量 Marker |
| 剩余物料返还 | 实验剩余的抗体、磁珠或 IP 产物按需返还，支持二次验证 |
| 结果判读 | 结合 IP 组、IgG 阴性对照与阳性对照的结果判读与组间比对 |
| 完整实验报告 | 实验步骤、抗体与试剂信息（厂家 / 货号）、裂解条件与结果说明 |
以下为 CO-IP 检测的典型结果示例。
图一 CO-IP 检测结果展示（IP: Ub 与目的蛋白 Western Blot 鉴定）
结果呈现说明：IP 组出现特异性条带表明两蛋白存在相互作用，阴性对照（IgG）组无条带可排除非特异性结合干扰，分子量 Marker 用于确认目的蛋白位于预期分子量处。建议设置阳性对照验证实验体系的可靠性。
互作体系对抗体、裂解条件与对照设置高度敏感，以下要点直接决定结果是否可信：
送样说明：细胞沉淀请尽量去除培养基并用预冷 PBS 洗涤，组织样品液氮速冻后干冰运输；同时请附上目标蛋白、抗体信息与预期互作对象，便于我们制定免疫沉淀与对照方案。
Co-IP 在细胞内天然环境中检测蛋白互作，能反映生理状态下的相互作用，但无法区分直接与间接互作；GST pull-down 在体外用纯化蛋白检测，可判断两个蛋白是否直接结合。两者常互为补充。
不能。Co-IP 只能说明细胞内存在相互作用，该互作可能由第三种蛋白或核酸介导。若需明确是否为直接结合，建议结合 GST pull-down 等体外实验进一步验证。
建议使用不同种属来源的抗体，以避免二抗识别 IP 抗体重链或轻链产生干扰条带；同时优先选择单克隆抗体，并确保 IP 抗体识别的表位不被互作蛋白遮盖。
常见原因包括目标蛋白与诱饵蛋白亲和力较低或互作短暂、裂解条件过于剧烈破坏了相互作用、抗体效价不足或表位被遮盖。我们会通过预实验优化裂解条件与抗体用量。
一般需提供至少 1×10⁷ 个细胞沉淀；组织样品需新鲜采集后液氮速冻、干冰运输。样本量有限时可提前沟通，我们会评估是否通过优化方案完成检测。
具体周期视样本数量、抗体情况与互作体系优化难度而定；方案与样品确认后我们会给出明确的时间安排。
蛋白互作研究常需多种方法交叉验证，以下服务可组合开展：
service@fenghbio.com
长沙市岳麓区麓云路100号
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