E1/E3 双缺失复制缺陷型腺病毒，不整合基因组、瞬时高表达，适合难感染细胞
腺病毒包装技术借助工具细胞（常用 HEK293 细胞），将携带目的基因的腺病毒穿梭质粒与病毒骨架质粒共转染，经同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒，再通过细胞扩增、裂解、浓缩纯化获得高滴度病毒液。
该载体可感染分裂与非分裂细胞，不整合宿主基因组、外源基因表达水平高，广泛应用于体外细胞基因过表达/敲低实验、动物体内基因递送、肿瘤基因治疗、疫苗研发以及基因编辑的体内外验证等领域。
丰晖生物提供一站式腺病毒包装服务，从质粒构建、共转染重组、病毒扩增纯化到滴度检测全程标准化操作，原始数据与完整报告同步交付，确保数据真实可靠。
核心应用场景：
提示：腺病毒基因组不整合宿主基因组，表达为瞬时高表达，适合短期观察；若需要长期稳定表达，建议选择慢病毒或 AAV 方案，我们可协助比较与衔接。
腺病毒（Adenovirus）为无包膜病毒颗粒，粒径 70～90 nm，基因组为线状双链 DNA，全长约 36 kb，两端含反向重复序列。本服务采用 5 型血清腺病毒载体，为 E1、E3 双缺失缺陷型：E1 为病毒复制必需基因，缺失后病毒丧失自主复制能力，仅能在 HEK293 包装细胞中通过反式互补实现扩增，保障实验安全性；E3 区主要介导病毒拮抗宿主免疫应答，缺失后可降低宿主体内的免疫反应。腺病毒侵染细胞后不整合宿主基因组，可实现外源基因的稳定瞬时表达。
本服务采用成熟高效的 AdMax 包装系统，依托 Cre-loxP 位点特异性重组原理，将携带目的基因的穿梭质粒与腺病毒骨架质粒共转染 HEK293 细胞，在重组酶介导下完成基因组重组与病毒包装。该体系重组效率高、病毒扩增能力强，可稳定获得高滴度重组腺病毒。
图1 腺病毒包装与基因组重组原理示意图
经典腺病毒包装依赖穿梭质粒与骨架质粒间的同源重组，效率相对较低；AdMax 系统通过 Cre-loxP 位点特异性重组替代随机同源重组，重组效率与病毒产量明显提高，也降低了获得病毒所需的摸索环节。
腺病毒不整合宿主基因组，外源基因表达水平高，适合短期高强度表达研究
宿主范围广，可感染分裂与非分裂细胞，常用于难转染细胞的基因操作
目的与对照病毒滴度 1×10⁹ GFU/ml，293T 细胞感染效率 ≥90%
可携带不同荧光标记，满足示踪与筛选需求
规范病毒操作平台与标准化流程，确保实验数据真实、客观、可靠
目的基因序列设计与穿梭质粒构建、测序验证
穿梭质粒与骨架质粒共转染 HEK293 细胞，经重组产生重组腺病毒
扩增培养后收集细胞，裂解释放病毒颗粒
经密度梯度离心或层析纯化，获得高滴度病毒液
测定病毒滴度并分装 -80 ℃ 保存，交付病毒液与完整报告
下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 质粒构建与测序 | 目的基因或干扰序列设计、载体构建与测序验证（含此环节） |
| 共转染与重组包装 | 穿梭质粒与骨架质粒共转染 HEK293 细胞 |
| 扩增、浓缩与纯化 | 扩增后裂解细胞，纯化获得高滴度病毒液 |
| 滴度检测与交付 | 功能滴度检测并分装保存，交付病毒液、数据与完整报告 |
上述安排包含质粒构建环节。若目的基因超过 3 kb 或具有特殊结构，我们会另行评估方案与周期。
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 过表达腺病毒 | 1 ml 目的病毒 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁹ GFU/ml；CDS 区 ≤5000 bp，保证滴度且在 293T 细胞感染效率 ≥90% |
| 干扰腺病毒（单靶点） | 1 ml 目的病毒 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁹ GFU/ml；序列由客户提供或我方设计，保证滴度与感染效率，不做干扰效果保证 |
| 干扰腺病毒（三保一） | 1 ml 目的病毒×3 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁹ GFU/ml；我方交付 3 个干扰腺病毒由客户自行筛靶；感染效率 ≥85% 条件下，保证 mRNA 水平至少一条可敲低至 80%~60% |
| 滴度检测与构建报告 | 滴度检测原始数据、载体图谱与测序结果，随病毒液一并交付 |
以下为腺病毒包装过程与感染细胞的典型结果示例。
结果呈现说明：包装过程中 HEK293 细胞出现典型 CPE 现象提示病毒成功包装；滴度以 GFU/ml 表示，报告提供滴度检测数据与感染细胞的荧光图片，便于评估病毒质量。
腺病毒感染的接种密度与细胞状态直接影响表达效果，以下要点请重点关注：
生物安全提示：腺病毒操作应在生物安全柜内进行并做好个人防护，实验废弃物按生物安全规范处理。
腺病毒基因组不整合宿主基因组，外源基因瞬时高表达，适合短期高强度表达与难感染细胞；慢病毒可整合基因组实现长期稳定表达；AAV 多在体内以游离伴随体形式长期存在且免疫原性低。可根据研究目的协助选择载体。
可以。腺病毒可感染分裂与非分裂细胞，对神经元等不增殖细胞也可通过调整接种汇合度实现感染，通常感染后 24 h 即可检测到目的基因表达。
过表达与干扰腺病毒默认交付滴度 1×10⁹ GFU/ml，并保证在 293T 细胞中感染效率 ≥90%。滴度以 GFU/ml 表示，报告提供滴度检测原始数据。
单靶点干扰腺病毒保证滴度与感染效率，不做干扰效果保证；三保一方案在感染效率 ≥85% 条件下，保证 mRNA 水平至少一条序列可敲低至 80%~60%。
包含。常规方案含质粒构建环节；若目的基因超过 3 kb 或具有特殊结构，我们会先评估可行性与方案，必要时另行沟通。
可以。腺病毒常用于体内基因递送，但因其免疫原性较高，在对外源刺激敏感的动物模型和组织中易引起炎症，建议结合预实验确定剂量与给药方式。
具体时间取决于目的基因大小、载体类型与排期，样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
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