平板集落形成实验，评价单个细胞的增殖潜能与克隆存活能力，量化克隆形成率
克隆形成实验（colony formation assay）是体外检测单个细胞增殖形成集落能力的经典方法，常用于评估细胞增殖潜能与克隆存活能力，也用于研究药物、辐射等处理对细胞存活与致瘤能力的影响。
与 CCK-8 / MTT 等群体水平的活力检测不同，克隆形成实验反映的是单个细胞长期增殖并形成克隆的能力，对低频率事件的检出更敏感，是评价长期增殖潜能的重要补充。
丰晖生物提供一站式克隆形成实验服务，从单细胞悬液制备、密度摸索、集落培养到固定染色与集落计数全程标准化操作，原始图片与完整报告同步交付。
核心应用场景：
提示：克隆形成实验对接种密度极其敏感，必须通过预实验确定。密度过高会导致集落融合无法计数，密度过低则集落数过少、统计误差大。
克隆形成实验基于细胞的贴壁增殖与克隆化生长能力。实验过程为：细胞在适当处理后按低密度稀释接种至培养皿（板）中，保证单个细胞独立贴壁；随后在适宜条件下培养 1–3 周，单个细胞通过连续增殖形成肉眼或显微镜下可见的集落。
集落经固定（常用甲醇或甲醇-冰醋酸）与染色（常用结晶紫或 Giemsa 染色）后计数，即可计算 克隆形成率 =（集落数 / 接种细胞数）× 100%。实验的关键在于准确的细胞计数与稀释，以确保实际接种细胞数准确，从而得到可靠的克隆形成率。
图1 克隆形成实验原理示意图
平板克隆形成实验在普通培养皿中进行，检测细胞的贴壁依赖增殖能力，适用于大多数贴壁细胞。
软琼脂克隆形成实验将细胞接种于琼脂或琼脂糖凝胶中，细胞无法贴壁，只有具备非锚定依赖生长能力的细胞（如转化细胞、肿瘤干细胞）才能形成集落，常用于评价细胞的恶性转化程度与致瘤潜能。
两者检测的能力不同，应根据研究目的选择。本服务默认提供平板克隆形成实验，如需软琼脂克隆请单独说明。
不同细胞系的克隆形成效率差异可达数十倍。密度过高会使相邻集落融合，无法准确计数；密度过低则集落数过少、统计误差大，无法体现组间差异。预实验的目的就是找到使对照组形成 50–200 个集落的接种密度，这是实验成立的前提。
可检测单个细胞的长期增殖能力，对低频率的克隆形成事件也能准确测定
通过计数集落数量并测量集落大小，可定量评估细胞的增殖潜能
适用于不同类型的细胞与细胞系，可根据实验目的调整接种密度与培养周期
覆盖肿瘤研究、药物筛选、干细胞研究、疾病机制探究与细胞老化研究等方向
克隆存活数据可与体内成瘤实验配合，共同评价细胞恶性程度
消化制备单细胞悬液，通过预实验确定使对照组形成 50–200 个集落的接种密度
按方案进行药物、辐射或基因干预处理，随后按确定密度接种至培养皿（板），轻柔摇匀防止细胞聚集
37 ℃ 静置培养 1–3 周，期间尽量减少移动，按需补充培养基
弃去培养基，清洗后固定，采用结晶紫或 Giemsa 染色并充分清洗
显微镜或肉眼计数集落（一般要求 ≥50 个细胞），计算克隆形成率并完成组间统计
下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 细胞准备与密度预实验 | 含接种密度梯度摸索 |
| 处理与接种 | 含药物或辐射处理 |
| 集落培养 | 视细胞类型与集落生长速度而定 |
| 固定染色与计数统计 | 集落计数与克隆形成率计算 |
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 原始培养皿照片 | 各培养皿整体原始照片与显微镜下局部照片（含标尺） |
| 集落计数数据 | 逐皿集落计数、集落大小分布与克隆形成率原始记录 |
| 统计与图表 | 组间比较与统计学检验结果，含克隆形成率与集落大小分布柱状图 |
| 完整实验报告 | 实验步骤、接种密度、培养基与试剂信息、培养周期与处理方案 |
以下为克隆形成实验的典型结果示例。
结果呈现说明：集落经结晶紫染色后呈紫色，可直接肉眼或显微镜计数。结果以克隆形成率的组间比较呈现；若处理组集落数明显减少或集落体积明显变小，均提示细胞增殖潜能受到抑制。
CCK-8/MTT 检测的是群体细胞的短期代谢活性；克隆形成实验检测的是单个细胞长期增殖形成克隆的能力，对低频率事件更敏感。两者可互补使用，联合评价短期活力与长期增殖潜能。
需通过预实验确定，目标是使对照组形成 50–200 个集落。不同细胞系的克隆形成效率差异可达数十倍，不能套用固定数值。
平板克隆检测贴壁依赖的增殖潜能，适用于大多数贴壁细胞；软琼脂克隆要求细胞具备非锚定依赖生长能力，常用于评价恶性转化程度与致瘤潜能。本服务默认提供平板克隆。
通常 1–3 周，取决于细胞增殖速度。克隆形成慢的细胞可能需要延长至 3 周以上，我们会根据预实验结果确定合适周期。
克隆形成率 =（集落数 / 接种细胞数）× 100%。集落判定标准统一为含 ≥50 个细胞的细胞团，报告中会注明计数标准。
具体周期包含接种密度的预实验与集落培养时间，取决于细胞增殖速度，克隆形成慢的细胞需要更长时间。方案确认时我们会给出明确的时间安排，建议尽早规划。
克隆形成常与增殖、凋亡及干性检测联合开展。以下服务可组合：
service@fenghbio.com
长沙市岳麓区麓云路100号
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