AAV病毒包装

腺相关病毒（AAV）属于微小病毒科，基因组为约 4.8 kb 的单链 DNA。野生型 AAV 通常需要腺病毒或疱疹病毒提供辅助功能，才能在其体内复制扩增。

研究中采用的重组腺相关病毒（rAAV）是在非致病的野生型 AAV 基础上改造而成。AAV 具有多种血清型，不同血清型对组织或器官的靶向亲和性不同。在人类和小鼠中，AAV 感染可介导外源基因发生低频率（不高于 2%）的定向整合，插入位置一般在 19 号染色体短臂（人类基因组中的 AAVS1 与小鼠中的 ROSA26 位点）；在不发生整合的情况下，病毒基因组以游离伴随体形式存在于被感染细胞内。

核心应用场景：腺相关病毒已广泛应用于神经、心血管、肝脏、肌肉、肺部等组织研究领域，给药方式通常为定位注射或整体注射。

丰晖生物提供一站式 AAV 病毒包装服务，支持多种血清型与组织特异性启动子的选择，全程标准化操作，原始数据与完整报告同步交付，确保数据真实可靠。

AAV 包装采用三质粒系统，即转移质粒、血清型质粒与辅助质粒，三者分工明确、共同完成病毒颗粒的组装与包装。

转移质粒：包含目的基因序列以及 AAV 的反向末端重复序列（ITR），ITR 是病毒基因组复制与包装的必需元件。

血清型质粒：包含 AAV 的主要结构蛋白基因 Rep 与 Cap。其中 Rep 蛋白是复制蛋白，负责 AAV 基因组的复制和包装；Cap 蛋白是衣壳蛋白，用于病毒颗粒的组装，也是决定血清型的关键。

辅助质粒：包含腺病毒的某些关键基因，如 E1A、E1B、E2A、E4 与 VA 基因等，这些基因提供额外的辅助因子，帮助 AAV 复制与包装。

包装、感染与表达过程

包装：三质粒转入 AAV-293 细胞后，转移质粒上的目的序列在 Rep 蛋白帮助下复制出单链 DNA 基因组，血清型质粒表达 VP 蛋白，辅助质粒表达辅助因子；衣壳蛋白自发组装成空壳，并将单链 DNA 基因组包裹进去，形成完整的 AAV 病毒颗粒。

感染：AAV 衣壳蛋白识别并结合细胞表面特定的糖基化受体（不同血清型识别不同受体，这是其组织靶向性的基础），随后细胞通过受体介导的内吞作用将病毒吞入。进入细胞后，AAV 被包裹在内涵体中运输，内涵体的酸化环境会引发衣壳构象变化。

表达：病毒通过核孔复合体进入细胞核，在核内完成脱壳并释放单链 DNA 基因组。单链 DNA 须先合成互补链形成双链 DNA，之后双链 DNA 上的目的基因便可被转录和翻译，实现 shRNA 转录或蛋白表达。rAAV 基因组通常不整合到宿主染色体中，而是以游离的伴随体形式长期稳定存在。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为不同启动子的 AAV 病毒在体内表达的典型结果示例。

AAV 病毒的保存、滴度与给药方式是体内实验成败的关键，以下要点请重点关注：

图1 丰晖生物常用血清型推荐表

AAV 载体常与下列服务组合，用于体内外基因递送与长期表达研究：