干扰稳株构建

shRNA 干扰稳株（shRNA stable cell line）是指将编码短发夹 RNA（shRNA）的外源 DNA 序列整合至宿主细胞基因组后，能够长期、稳定地干扰（敲低）该细胞内特定内源靶基因表达的细胞系。与过表达稳株的“获得性功能”研究相反，干扰稳株主要用于丧失性功能研究，可实现对目的基因的持久性抑制。

构建干扰稳株常用慢病毒法：慢病毒可将 shRNA 表达框高效整合入宿主基因组，并随细胞分裂稳定遗传，相较反复瞬时转染更适合长期实验观察。在此基础上，通常配合抗性加压筛选获得遗传背景一致的稳定细胞群。

丰晖生物提供一站式干扰稳株构建服务，覆盖 shRNA 设计、慢病毒包装、感染筛选到 qPCR/WB 干扰验证的全流程，原始数据与完整报告同步交付，确保数据真实可靠。

干扰慢病毒是基于 HIV-1 改造的复制缺陷型病毒载体系统。慢病毒侵染宿主细胞后，病毒基因组进入细胞质，经自身反转录酶反转录为 DNA，随后入核并随机整合至宿主细胞基因组中。

整合的外源序列可随宿主基因组转录产生 shRNA，shRNA 转运至细胞质后被 Dicer 核酸酶剪切生成 siRNA。成熟 siRNA 组装进入 RISC 复合体，其中稳定性较弱的正义链被降解，仅保留反义链形成活性沉默复合物。

复合物中的 siRNA 反义链特异性结合靶标 mRNA 后，RISC 复合体内的 AGO2 蛋白可切割靶 mRNA，在转录后水平抑制靶基因表达，实现基因沉默。

该过程可循环发生：siRNA 反义链切割靶 mRNA 后并不被消耗，可随 RISC 复合体解离并持续识别、切割新的靶 mRNA，因此干扰稳株能够稳定发挥长效基因干扰作用。

图1 shRNA 干扰稳株构建与 RNAi 基因沉默原理示意图

shRNA 与 siRNA 干扰的区别

siRNA 通常以双链 RNA 形式直接转染细胞，作用时间较短，适合短期快速验证；shRNA 通过 DNA 载体在细胞内持续转录生成，并可整合入基因组长期表达，更适合需要长期敲低的稳定株构建。

为什么建议多条 shRNA 筛靶

不同 shRNA 序列对靶 mRNA 的可及性差异较大，敲低效率可相差数倍。因此通常设计 3–4 条独立 shRNA 平行验证，选择敲低效率最高且脱靶效应较低的一条用于稳株构建。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为 A549 细胞 CPBHM 基因干扰四保一稳株的验证结果示例。

图一 A549 细胞 CPBHM 基因干扰四保一稳株 qPCR 验证结果

干扰稳株常与以下服务组合开展，可统一设计序列、同步推进实验：