Cell Proliferation Assay

细胞增殖

CCK-8 / MTT / EdU 多方法可选,定量评价细胞活力、增殖速率与药物抑制率

CCK-8 / MTT / EdU
增殖活力
抗肿瘤药筛
定量数据完整

细胞增殖实验用于定量检测细胞生长、增殖活力与细胞数量变化,核心指标包括活细胞数量、细胞增殖速率、细胞活力与抑制率 / 促增殖率,是药物筛选与基因功能研究中最基础、最高频的检测项目之一。

常用检测方法有 CCK-8、MTT、EdU 三种,分别从细胞代谢活性、线粒体脱氢酶活性与 DNA 合成三个维度反映增殖状态。

丰晖生物提供一站式细胞增殖检测服务,可根据研究目的选择合适方法或组合使用,配套标准化 SOP 与完整原始数据,原始数据与完整报告同步交付。

核心应用场景:

  • 抗肿瘤药物筛选 — 药物敏感性评价、IC50 测定与浓度梯度筛选
  • 生长因子研究 — 评价生长因子或条件培养基对增殖的促进作用
  • 基因功能验证 — 过表达 / 干扰 / 敲除对细胞增殖的影响
  • 细胞毒性检测 — 材料、化合物与环境因素的细胞毒性评价
  • 细胞周期相关研究 — 增殖变化与周期阻滞的关联分析

提示:三种方法各有侧重,不能相互替代——CCK-8 / MTT 反映代谢活性,EdU 反映 DNA 合成。若处理因素可能同时影响细胞代谢状态,建议以 EdU 或直接计数法交叉验证,结论更可靠。

三种方法均以“活细胞数量变化”为定量基础,但检测的分子事件不同,适用场景也各有侧重。

CCK-8 —— 水溶性四唑盐法

CCK-8 试剂的核心成分是 WST-8,一种水溶性四唑盐。在活细胞脱氢酶的作用下,WST-8 被还原生成橙黄色的水溶性甲臜(formazan)产物,生成量与活细胞数量成正比;死细胞不具备该还原能力,不产生显色反应。

采集方式:直接在培养孔中加入 CCK-8 试剂孵育 1–4 h,用酶标仪读取 450 nm 吸光度即可。由于产物水溶,无需弃液与溶解结晶,操作简便、灵敏度高,适合悬浮细胞与高通量筛选。

局限性:检测信号受细胞代谢状态、培养基成分(如酚红、血清)与细胞密度影响,必须设置空白孔与溶剂对照。

MTT —— 线粒体脱氢酶活力法

MTT 可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为不溶于水的蓝紫色甲臜结晶;弃去培养基后加入 DMSO 溶解结晶,用酶标仪读取 570 nm(参考波长 630 nm)吸光度,间接反映活细胞数量与代谢活性。

MTT 更适用于贴壁细胞,试剂成本相对较低,但步骤较多(需弃液、溶解结晶),属于终点检测,操作中需注意 DMSO 兼具细胞毒性且易挥发。

EdU —— DNA 合成标记法

EdU(5-乙炔基-2′-脱氧尿苷)是一种胸腺嘧啶核苷类似物,可在 DNA 合成期(S 期)代替胸腺嘧啶(T)掺入新合成的 DNA 链中。随后通过 EdU 上的炔基与荧光叠氮染料(如 Apollo®、Azide-Fluor 系列)发生铜催化点击化学反应,即可标记正在增殖的细胞。

EdU 检测特异性高、可定位到单细胞,常用荧光显微镜或流式细胞仪分析,适合评价增殖细胞比例与增殖定位;但由于需固定与透膜处理,同一孔无法长期连续监测。

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一站式服务

细胞构建与增殖检测在同一平台完成,严控细胞本源与代次一致性

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三种方法可选

CCK-8、MTT、EdU 按研究目的自由组合,并提供方法选择与结果解读建议

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标准化 SOP

统一铺板密度、试剂批次与检测时点,原始数据完整、可追溯

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支持复杂模型

适配悬浮细胞、原代细胞、共培养体系与三维培养等复杂模型

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个性化实验设计

支持浓度梯度、时间梯度、多时间点动态检测与 IC50 拟合

1

铺板与预实验

按细胞类型确定接种密度与贴壁时间,通过预实验确定最佳检测时点与试剂孵育时长

2

药物处理或基因干预

设置浓度梯度与时间梯度,配套空白对照、溶剂对照与阴性对照

3

加入检测试剂

CCK-8 直接加入试剂孵育 1–4 h;MTT 孵育后弃液并加 DMSO 溶解结晶;EdU 孵育后固定透膜并进行点击化学反应

4

信号读取

酶标仪读取吸光度(CCK-8 450 nm / MTT 570 nm),或荧光显微镜、流式细胞仪采集 EdU 荧光

5

数据分析与报告

计算相对活力、增殖抑制率与 IC50,完成组间统计与图表输出

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、数量与实验方案确认后,我们会给出明确的时间安排。

服务内容工作说明
铺板与预实验含接种密度与最佳检测时点摸索
药物处理与检测视处理时间点数量而定
数据分析与报告出具含 IC50 拟合与统计图表

如需同时提供 EdU 与 CCK-8 两种读出结果,可在同一批细胞上平行开展,无需重复制备样本。

交付内容说明
逐孔原始检测数据酶标仪逐孔原始吸光度读数,或 EdU 原始荧光图像与流式数据
活力与抑制率数据相对细胞活力、增殖抑制率、IC50 拟合曲线与置信区间(如适用)
统计与图表组间比较、统计学检验结果与折线图 / 柱状图
完整实验报告实验步骤、试剂与耗材信息、铺板密度、检测时点与分组方案

以下为细胞增殖检测的典型结果示例,涵盖 EdU 荧光与 CCK-8 活力检测两种读出方式。

结果呈现说明:EdU 结果以荧光标记的增殖细胞比例或荧光强度表示;CCK-8 结果以相对细胞活力(处理组 / 对照组 ×100%)表示,可绘制浓度—效应曲线并拟合 IC50。报告同时提供逐孔原始读数与重复实验数据。

1
必须做预实验确定铺板密度 — 密度过高易提前出现接触抑制、吸光度超出线性范围;密度过低则信号弱。不同细胞差异很大,须按细胞类型摸索。
2
设置空白孔与对照孔 — 需设置只含培养基与检测试剂、不含细胞的空白孔用于扣除背景;并按需设置溶剂对照(如 DMSO)与阴性对照。
3
CCK-8 操作要点 — 试剂需避光保存;加入后避免产生气泡(气泡会干扰吸光度读数);培养基中的酚红会影响读数,建议使用无酚红培养基或扣除空白。
4
MTT 操作要点 — 甲臜结晶须充分溶解(可适当振摇);DMSO 具有细胞毒性且易挥发,操作需迅速;MTT 属终点检测,不可用于连续动态监测。
5
EdU 操作要点 — 孵育时间需按细胞周期长度确定(常用 2 h 至过夜),过短则阳性率偏低;点击化学反应需避光进行,固定与透膜步骤直接影响染色效果。
6
不同方法结果不可横向比较 — CCK-8 / MTT 反映代谢活性,EdU 反映 DNA 合成,三者的绝对值不能直接比较,同一实验内应统一方法。
7
动态监测需多时间点 — 仅测单一时间点可能错过增殖差异,建议设置多个时间点绘制生长曲线,结果更具说服力。

QCCK-8、MTT、EdU 怎么选?

CCK-8 操作最简便、灵敏度高,适合悬浮细胞与高通量筛选;MTT 成本较低、适合贴壁细胞,但步骤较多;EdU 直接标记 DNA 合成,特异性高、可定位到单细胞,适合评价增殖细胞比例。若处理因素可能影响细胞代谢状态,建议选择 EdU 或加做直接计数法交叉验证。

Q可以测定 IC50 吗?

可以。设计浓度梯度并设置复孔后,我们会输出抑制率曲线、IC50 拟合结果及置信区间。

Q细胞量有限怎么办?

可改用 96 孔或 384 孔板降低每孔所需细胞数,但需重新确定铺板密度与检测时点。样本量极少时也可采用 EdU 结合图像定量的方案。

Q悬浮细胞可以做吗?

CCK-8 最适合悬浮细胞(无需弃液,避免细胞丢失);MTT 因需弃液与洗涤,悬浮细胞易损失,不建议首选。

Q检测周期多长?

具体周期需结合处理时间点数量、是否需要浓度梯度与 IC50 拟合评估,方案确认时我们会给出明确的时间安排。

Q报告包含哪些内容?

包含逐孔原始读数、相对活力与抑制率计算、IC50 拟合结果(如适用)、统计图表与完整实验报告。

需要细胞增殖检测服务?

告知细胞类型与药物梯度,我们选择合适方法并完成检测,交付增殖曲线、抑制率与逐孔原始数据

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