酪酰胺信号放大实现同一张切片多靶标荧光标记，信号显著增强并支持多蛋白共定位
酪酰胺信号放大（Tyramide Signal Amplification, TSA）是一类利用辣根过氧化物酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法，可在同一组织切片上进行多种抗原标记，属于多标记免疫荧光染色技术，广泛应用于 IHC、IOC、ISH/FISH 等原位检测实验。
丰晖生物提供一站式 TSA 多色荧光染色服务：从切片与抗原修复、单标预实验、多轮标记到共聚焦成像全程标准化操作，原始图片与完整实验报告同步交付。
核心应用场景：
提示：TSA 多标方案的成败高度依赖标记顺序与荧光搭配。正式实验前我们通常会先开展单标预实验，确认各靶标的染色特异性与信号强度，再确定多轮标记的顺序与通道分配。
TSA 的核心是酶促信号放大：抗体或探针上偶联的 HRP 在过氧化氢存在下，将带有标记的非活化酪酰胺转变为活化酪酰胺；活化的酪酰胺迅速与相邻蛋白分子中富含电子的区域（酪氨酸残基）形成稳定的共价结合，从而在抗原所在处沉积大量标记分子，实现特异性标记与信号放大。
由于相邻蛋白含有大量酪氨酸结合位点，目标抗原处会富集大量标记分子，使弱信号获得显著增强；又因结合为共价沉积，即使后续经抗体洗脱去除前一抗体系，已沉积的荧光信号仍可保留，因而可在同一张切片上依次完成多轮标记，实现多色染色。
图1 TSA 酪酰胺信号放大原理示意图
借助依次标记与抗体洗脱，同片可组合多种同源一抗
酪酰胺共价沉积使荧光信号大幅增强，适合低丰度靶标
在同一张切片上实现多个靶标的荧光标记与空间定位
正式多标前先完成单标预实验，确认特异性与信号强度
提供各通道原始图片与成像参数，结果可溯源
组织切片制备，必要时由我方完成切片
按靶标要求修复抗原并封闭非特异位点
逐一验证各靶标抗体的特异性与信号强度
按弱先强后顺序依次孵育抗体、TSA 显色并洗脱前一抗体系
多通道荧光采集代表性视野图像
分析各通道信号与共定位情况，出具完整报告
下表为本项服务的常规工作环节与说明。样本类型、靶标数量与标记方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 样本准备与切片 | 组织切片制备与预处理 |
| 抗原修复与封闭 | 按各靶标要求确定修复与封闭条件 |
| 单标预实验 | 验证各靶标特异性与信号强度 |
| 多轮 TSA 标记 | 按标记顺序依次完成多靶标染色 |
| 成像与图像分析 | 多通道采集并分析共定位情况 |
| 报告出具 | 汇总实验步骤、图像与判读结果 |
多标方案的标记顺序与荧光搭配需结合靶标丰度与定位确定，我们会在预实验基础上给出优化后的实施方案。
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 原始荧光图片 | 各通道原始图片（含通道信息与标尺） |
| 真实实验结果 | 多标染色图像，如实呈现各靶标信号 |
| 实验原始数据 | 抗体信息、标记顺序与成像参数记录 |
| 完整实验报告 | 实验步骤、试剂信息与结果判读说明 |
| 剩余样本返还 | 剩余物料可按约定返还 |
以下为 TSA 多色荧光染色的典型结果示例。
图一 肿瘤微环境中细胞标记示例（六标七色）
结果呈现说明：报告提供各标记通道的原始图像与合成图像，直观展示多种细胞或蛋白在组织中的分布与共定位关系；成像参数与抗体信息一并记录，便于重复与比较。
送样要求：可提供组织切片或组织块，并注明物种、靶标组合与预期定位；抗体可自备或由我方匹配。多标方案建议预留预实验环节。
常规免疫荧光依赖荧光二抗直接标记，信号强度有限；TSA 通过 HRP 催化酪酰胺共价沉积，可显著放大信号，并能在同一张切片上依次完成多轮标记，适合低丰度靶标与多蛋白共定位研究。
TSA 标记会消耗抗原周围蛋白上的酪氨酸残基。若先染强靶标，其周围位点被大量占用，后续弱靶标可能因缺少结合位点而出现阴性结果；当靶点定位相同或相近时更需遵循弱先强后。
TSA 多标通过依次孵育并洗脱前一抗体系，可突破常规双染对一抗种属来源的限制，因此一定程度上可组合同源一抗；具体可行性需结合抗体特异性通过预实验确认。
一般将强靶标配弱荧光或短波长荧光、弱靶标配强荧光或长波长荧光，以平衡信号强度；易串色的通道尽量用于弱靶标，并优先分配定位距离较远的靶标。
可支持多标方案，具体可行标数取决于靶标组合、抗体可用性与荧光通道数量。建议在方案阶段明确靶标，我们会通过单标预实验确定可实施的标数与通道分配。
具体周期需结合靶标数量、预实验结果与成像安排评估；方案确认后我们会给出明确的时间安排。
TSA 多色荧光染色常与其他原位检测方法配合使用。以下服务可组合：
service@fenghbio.com
长沙市岳麓区麓云路100号
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