shRNA载体构建

shRNA（短发夹 RNA）是一段含反向互补序列、中间以环结构相连的双链 RNA，导入细胞后经 Dicer 酶切割为 siRNA，介导靶基因 mRNA 降解，实现基因沉默。shRNA 载体负责将 shRNA 稳定递送至细胞，常用慢病毒载体、腺病毒载体与质粒载体。

丰晖生物提供一站式 shRNA 载体构建服务：从靶序列分析、shRNA 序列设计、载体构建到测序验证全流程标准化操作，原始数据与完整实验报告同步交付，确保结果真实可靠。方案包括单条 shRNA 与三保一（3 条 shRNA + 1 条阴性对照）两类，可按研究需求选择。

shRNA 干扰载体转染宿主细胞后进入细胞核，在 RNA 聚合酶 Ⅲ 的作用下转录出 shRNA 并转运至细胞质。

细胞质中 Dicer 酶将 shRNA 剪切为 siRNA 双链，双链随后组装入 RISC 复合体并解旋，正义链被降解，仅反义引导链留存形成活化 RISC。该复合体依靠引导链特异性识别并结合靶 mRNA，激活 AGO2 蛋白切割降解靶 mRNA，完成转录后基因沉默。

反义引导链可循环发挥作用，持续降解多条靶 mRNA，因此 shRNA 介导的沉默效果高效且持久。

图1 shRNA 载体介导基因沉默的原理示意图

载体选择：慢病毒、腺病毒与质粒

质粒载体操作简单、成本较低，适合常规瞬时干扰与序列筛选；慢病毒载体可将 shRNA 整合至宿主基因组，适合构建长期稳定沉默的干扰稳株；腺病毒载体感染效率高、表达量强，适合难转染细胞与短期高丰度干扰实验。载体均可搭配报告基因（如 GFP）与筛选抗性，便于后续筛选与观察。

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。

以下为针对人 SLC16A10 基因设计 shRNA 并构建于 pGPU6-GFP-Neo 干扰载体的结果示例。

图一 针对人 SLC16A10 基因的 shRNA 在 pGPU6-GFP-Neo 载体上的构建结果

shRNA 载体构建常与序列筛选、病毒包装及稳株构建衔接开展，以下服务可组合：