Immunohistochemistry (IHC)

免疫组化IHC

石蜡切片原位显色,定位组织内目标蛋白的表达部位与强度,形态与表达同步呈现

原位蛋白检测
石蜡切片
DAB 显色
病理形态判读

免疫组织化学(IHC)依托抗原与抗体特异性结合的原理,借助标记抗体对组织切片内的目标蛋白进行原位显色。通过显微镜观察显色的位置与强弱,即可确定目标蛋白的表达部位与表达水平,同时保留组织形态信息,广泛用于病理诊断与基础科研。

丰晖生物提供一站式免疫组化 IHC 服务:从样本接收、组织固定与包埋、切片、抗原修复、抗体孵育、DAB 显色到显微成像全程标准化操作,原始图片与完整实验报告同步交付。

核心应用场景:

  • 肿瘤标志物研究 — 检测肿瘤组织中目标蛋白的表达与分布
  • 组织定位研究 — 明确蛋白在特定组织或细胞类型中的表达部位
  • 病理形态观察 — 结合组织形态评估病变与蛋白表达的关系
  • 基因功能验证 — 比较处理组与对照组靶蛋白的表达差异

提示:免疫组化结果依赖抗体的特异性与抗原修复条件。委托时请尽量提供目标蛋白名称与推荐抗体信息(若有),我们会先开展抗体适用性与稀释比例预实验,确认染色特异性后再批量开展。

免疫组化基于抗原-抗体特异性结合的原理:目标组织中的抗原与特异性一抗结合后,再与酶或荧光素标记的二抗(或显色系统)反应,通过化学显色确定组织细胞内抗原(多肽与蛋白质)的位置与量,实现对其的定位、定性与相对定量分析。

常用的显色系统为辣根过氧化物酶(HRP)+ DAB:DAB 在 HRP 与过氧化氢存在下被氧化,生成棕色不溶性沉淀并沉积在抗原所在部位,从而在普通光学显微镜下即可观察。为降低内源性过氧化物酶干扰,制片过程中需先进行过氧化氢封闭处理。

显色与结果判读

DAB 显色呈棕色,目标蛋白表达越强、越集中,显色越深、越明显。判读时结合组织形态与染色分布,可区分细胞核、细胞质或细胞膜等不同定位模式;必要时通过半定量评分(如综合阳性细胞比例与染色强度)对表达水平进行比较。

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抗原抗体特异性定位

原位显示目标蛋白在组织与细胞中的表达部位与强弱

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整套新进仪器设备

配备纯水仪、徕卡显微镜与徕卡切片机等设备,成像清晰

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标准 SOP,数据可靠

切片、修复、孵育、显色到成像全程标准化操作

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代理多品牌抗体

抗体种类齐全,可按目标蛋白匹配适宜抗体

🧪

原始图片与数据交付

提供高质量染色图片与原始实验数据,结果可溯源

1

样本接收与固定

接收组织样本,按规范固定以保留抗原与形态

2

脱水包埋与切片

石蜡包埋后切片,控制切片厚度与完整性

3

抗原修复与封闭

按抗体要求修复抗原,并封闭内源性过氧化物酶与非特异位点

4

一抗 / 二抗孵育

孵育目的蛋白一抗与标记二抗,严格控制浓度、时间与温度

5

DAB 显色与复染

DAB 显色后复染细胞核,控制显色时间避免过深

6

显微成像与报告

采集代表性视野图像并出具完整实验报告

下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品状态、目标蛋白与抗体信息确认后,我们会给出明确的时间安排。

服务内容工作说明
样本接收与固定包埋按组织类型进行固定与石蜡包埋
切片与抗原修复控制切片厚度,按抗体要求选择修复方式
抗体孵育与显色含抗体稀释比例预实验,DAB 显色并复染
显微成像采集代表性视野的染色图片
结果判读与报告出具结合形态进行表达判读与结果汇总

目标蛋白与样本类型确认后,我们会先开展抗体适用性与稀释比例的预实验,确认染色特异性后再批量开展;时间安排随样本数量与抗体情况确定。

交付内容说明
原始显微图片代表性视野染色图片(含物镜倍数与标尺)
真实实验结果染色结果如实呈现实际组织形态与染色情况
实验原始数据抗体信息、稀释比例、修复条件与显色记录
完整实验报告实验步骤、试剂信息与结果判读说明
剩余样本返还剩余物料可按约定返还

以下为免疫组化 IHC 检测的典型结果示例。

结果呈现说明:报告中提供不同处理组或不同组织的代表性染色图片,展示目标蛋白的表达部位与强弱;必要时结合阳性细胞比例与染色强度进行半定量评分,便于组间比较。

1
过氧化氢封闭时间要控制 — 使用 3% 过氧化氢溶液消除内源性过氧化物酶活性时,孵育时间一般为 5–10 分钟,时间过长可能损伤抗原或导致背景异常。
2
易脱片组织慎用强修复 — 皮肤、骨组织、脑组织等较易脱片的组织,应尽量避免微波修复与高压修复,以降低脱片风险。
3
DAB 显色需控制时间 — DAB 停留时间过长会造成染色过深、背景加重,应结合实验温度与实时观察结果适当调整显色时间。
4
抗体需匹配与预实验 — 不同抗体对固定液与修复条件的要求不同,正式实验前建议进行抗体适用性与稀释比例预实验。
5
对照设置不可省略 — 建议设置阳性与阴性对照,用于评估染色特异性、排除背景干扰。
6
切片质量影响判读 — 切片过厚、褶皱或脱片都会影响染色与拍照效果,需在制片环节严格把控。

送样要求:请提供状态良好的组织或已完成固定的样本,并注明物种、组织类型与目标蛋白信息;样本量有限或抗体来源特殊时请提前沟通。

Q免疫组化可以检测哪些样本?

常见样本包括石蜡包埋组织切片、冰冻切片以及细胞爬片等。石蜡切片可保留较完整的组织形态,是免疫组化最常用的样本类型;若提供新鲜组织,我们可协助完成固定、包埋与切片。

Q需要提供抗体吗?

可提供自有抗体,也可由我方根据目标蛋白匹配市售抗体。不同抗体对固定液与抗原修复条件要求不同,正式实验前我们会进行适用性与稀释比例预实验,以确认染色特异性。

Q如何判断染色结果的可靠性?

结果可靠性依赖抗体特异性、抗原修复条件与对照设置。报告中会提供实验步骤、抗体信息与代表性图片,并根据需要设置阳性与阴性对照;判读时结合组织形态综合评估。

Q为什么会出现背景染色过深?

常见原因包括内源性过氧化物酶未充分封闭、DAB 显色时间过长、抗体浓度偏高或孵育时间过长、组织干片等。我们会针对具体情况排查并优化条件。

Q结果如何量化?

可采用半定量评分,例如结合阳性细胞比例与染色强度进行综合评分,或在同一条件下比较不同组别的染色强弱;报告中会给出判读记录与代表性图片。

Q检测需要多长时间?

具体周期需结合样本数量、抗体情况与预实验结果评估;方案确认后我们会给出明确的时间安排。

需要免疫组化 IHC 服务?

提供样本与目标蛋白信息,技术团队完成抗体适用性预实验与染色条件优化,交付高质量染色图片与完整报告

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