复制缺陷型慢病毒载体，滴度达 1×10⁸ TU/ml，可感染原代与干细胞
慢病毒包装以 HIV 改造而来的复制缺陷型慢病毒载体为核心：将携带目的基因的转移质粒与包装质粒、包膜质粒共转染 293 包装细胞，细胞分泌含目的基因的慢病毒上清，经收集、浓缩纯化后得到病毒液。
该载体可稳定整合至宿主细胞基因组，既能感染分裂细胞，也能高效感染干细胞、原代细胞等非分裂细胞，广泛用于稳定细胞株构建、基因过表达/干扰、干细胞基因修饰、肿瘤体内功能研究及基因编辑稳转模型构建等场景。
丰晖生物提供一站式慢病毒包装服务，从质粒构建、三质粒共转染、病毒收获浓缩到滴度检测全程标准化操作，原始数据与完整报告同步交付，确保数据真实可靠。
核心应用场景：
提示：慢病毒的效果以滴度与感染效率为客观指标。过表达与干扰（单靶点）慢病毒保证滴度与 293T 细胞感染效率；干扰效果与敲除效果受靶序列与细胞背景影响，不单独保证，我们会在方案阶段说明并建议筛靶方案。
包装：将慢病毒转移质粒、包装质粒与包膜质粒共转染工具细胞。转移质粒转录出携带目的基因的病毒 RNA 基因组，包装与包膜质粒则翻译出 Gag、Pol 蛋白与 VSV-G 包膜蛋白；这些蛋白与 RNA 在细胞膜上组装成新的、不完整的病毒颗粒，并从细胞表面出芽释放到培养上清中，最终得到复制缺陷型慢病毒颗粒。
感染：病毒颗粒表面的 VSV-G 包膜蛋白与目标细胞膜上的受体结合，随后病毒包膜与细胞膜融合，将含有病毒 RNA 基因组及逆转录酶、整合酶等蛋白的核心结构释放到细胞质中。病毒 RNA 基因组在逆转录酶作用下被逆转录为双链 DNA（前病毒 DNA）。
入核：前病毒 DNA 与整合酶等蛋白形成预整合复合体（PIC），其上的核定位信号（NLS）使复合体能够通过核孔主动进入细胞核。
整合：进入细胞核后，病毒 DNA 在整合酶（Integrase）的催化下随机插入宿主细胞基因组。细胞分裂时，整合的病毒 DNA 随宿主基因组一起复制，细胞利用自身的转录和翻译系统持续表达目的基因或 shRNA 干扰片段。
图1 慢病毒包装、感染与基因组整合原理示意图
MOI（感染复数）指感染单个细胞所用的病毒颗粒数，MOI 越高感染几率越大，过高则可能带来细胞毒性。正式感染前需通过预实验确定目的细胞的最佳 MOI，并结合嘌呤霉素浓度摸索确定筛选条件。
慢病毒载体已删除病毒复制所需基因，只能由包装细胞反式互补产生，不能在靶细胞中自主复制；但操作仍应在生物安全柜中进行，并做好个人防护与废弃物处理。
改良包装系统，包装效率与滴度高，慢病毒易转导、批次稳定
既能感染分裂细胞，也能高效感染干细胞、原代细胞等难转染细胞
目的与对照病毒滴度 1×10⁸ TU/ml，293T 细胞感染效率 ≥90%
携带荧光标签与筛选标签，可按需更换荧光基团与筛选抗性
规范病毒操作平台与标准化 SOP 流程，实验数据真实、客观、可溯源
目的基因或 shRNA 序列设计，转移质粒构建并测序验证
转移、包装、包膜质粒共转染 293T 包装细胞
收集含病毒上清，经离心与浓缩纯化获得浓缩病毒液
在 293T 细胞上测定功能滴度，出具滴度检测原始数据
小量分装并于 -80 ℃ 保存，交付病毒液与完整报告
下表为本项服务的常规工作环节与说明。样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
| 服务内容 | 工作说明 |
|---|---|
| 质粒构建与测序 | 目的基因或干扰序列设计、载体构建与测序验证（含此环节） |
| 病毒包装与收获 | 三质粒共转染 293T 细胞，收集并浓缩病毒上清 |
| 滴度检测 | 功能滴度检测，过表达与干扰病毒保证 1×10⁸ TU/ml |
| 分装与交付 | 小量分装 -80 ℃ 保存，交付病毒液、检测数据与完整报告 |
上述安排包含质粒构建环节。若目的基因超过 2 kb 或具有特殊结构，我们会另行评估方案与周期。
| 交付内容 | 说明 |
|---|---|
| 过表达慢病毒 | 1 ml 目的病毒 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁸ TU/ml；CDS 区 ≤3000 bp，保证滴度且在 293T 细胞感染效率 ≥90% |
| 干扰慢病毒（单靶点） | 1 ml 目的病毒 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁸ TU/ml；序列由客户提供或我方设计，保证滴度与感染效率，不做干扰效果保证 |
| 干扰慢病毒（三保一） | 1 ml 目的病毒×3 + 1 ml 对照病毒，滴度 1×10⁸ TU/ml；我方交付 3 个干扰慢病毒由客户自行筛靶；感染效率 ≥85% 条件下，保证 mRNA 水平至少一条可敲低至 80%~60% |
| 敲除慢病毒 | 1 ml 目的病毒，滴度 1×10⁸ TU/ml；可提供单靶点或双靶点，序列由客户提供或我方设计，不保证敲除效果 |
以下为慢病毒滴度检测与感染细胞的典型结果示例。
结果呈现说明：滴度采用功能滴度（TU/ml）表示，通过梯度稀释感染 293T 细胞后计数荧光阳性细胞计算；报告同时提供滴度检测原始数据与感染效率记录，便于评估病毒批次质量。
慢病毒涉及生物安全操作，且滴度与感染效率受操作细节影响，以下要点请重点关注：
送样/委托要求：委托包装需提供目的基因序列或 shRNA 靶序列、载体与标签需求；若客户自备质粒，请提供质粒图谱、测序结果与足量高纯度质粒，我们会先行质检。
可以。慢病毒通过 VSV-G 包膜介导进入细胞，不依赖细胞分裂，因此既能感染分裂细胞，也能高效感染干细胞、原代细胞等非分裂细胞，是难转染细胞基因修饰的常用工具。
过表达与干扰（单靶点）慢病毒默认交付滴度 1×10⁸ TU/ml，并保证在 293T 细胞中感染效率 ≥90%；滴度通过功能滴度法测定，报告提供滴度检测原始数据。
单靶点干扰慢病毒保证滴度与感染效率，不做干扰效果保证；三保一方案在感染效率 ≥85% 条件下，保证 mRNA 水平至少一条序列可敲低至 80%~60%。目的基因表达量很低时无法保证干扰效率。
包含。常规方案已含质粒构建环节；若目的基因超过 2 kb 或具有特殊结构，我们会先评估可行性与方案，必要时另行沟通。
病毒液小量分装后于 -80 ℃ 保存，避免反复冻融；运输采用干冰。若长时间存放后再使用，建议先重新检测滴度。
可以。慢病毒可将外源序列整合至宿主基因组并随细胞分裂稳定遗传，感染后通过荧光分选或抗性加压筛选即可获得稳定细胞株，我们也提供配套的稳株构建服务。
具体时间取决于目的基因大小、载体类型与排期，样品与实验方案确认后，我们会给出明确的时间安排。
service@fenghbio.com
长沙市岳麓区麓云路100号
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