自噬，这一细胞内高度保守的降解过程，就像细胞专属的 “清洁队”，能清除受损的蛋白质、细胞器，维持细胞内环境稳态，在发育、免疫和疾病发生发展等多个生理、病理过程中扮演关键角色。自噬流，描述的正是自噬发生过程中，自噬体形成、与溶酶体融合，以及底物降解的这一动态流程。检测自噬流，对理解自噬机制、疾病发生发展及寻找干预靶点至关重要。
检测自噬流的方法有多种，以下是一些常见的方法：
电镜观察自噬体的形成——自噬检测金标准
电镜检测自噬主要是基于辨认自噬体结构特征
Western blot 检测自噬相关蛋白
p62作为自噬的重要受体，主要依赖于自噬途径进行降解。因此，P62的蛋白水平也常常用来指示自噬的降解情况。
LC3 双荧光标记法：观测自噬流的神器！
这个方法是用同时带有 RFP 和 GFP 的病毒感染细胞。GFP 在酸性环境下会淬灭，而 mRFP 不受影响。当自噬发生时，会看到明亮的黄色荧光，这就是被红色荧光和绿色荧光同时标记的自噬体啦！当自噬体和溶酶体融合，pH 值降低，GFP 荧光淬灭，就只能看到红色荧光了呢！所以，GFP 的减弱表示自噬溶酶体形成顺利，GFP 越少，自噬小体到自噬溶酶体的流通就越顺畅。反之，融合被抑制，自噬溶酶体进程就受阻了哦！而 mRFP 一直稳定表达，通过 GFP 与 mRFP 的荧光比例就能评价自噬。
下面推荐丰晖生物检测自噬流的相关产品
（1）慢病毒（Lentivirus）
推荐病毒：
Lv-LC3B-oe(mCherry,GFP)慢病毒
Lv-LC3-oe(RFP，GFP)慢病毒
（2）腺病毒（Adenovirus）
推荐病毒：
Adv-LC3B-oe(mCherry,GFP)腺病毒
Adv-LC3B-oe(RFP,GFP)腺病毒
（1）A549-mRFP-GFP-LC3B自噬双标稳株
（2）MCF-7-mCherry-GFP-LC3自噬双标稳株
（3）SH-SY5Y-mCherry-GFP-LC3自噬双标稳株
以下是我们构建自噬双标稳株的案例分享：
推荐：
ptfLC3（丰晖货号：BR124）
pCDH-CMV-mRFP-GFP-hLC3B-EF1A-Puro（丰晖货号：BR641）
推荐：
pEGFP-LC3b（丰晖货号：BR161）
pmCherry-LC3a（丰晖货号：BR156）
推荐：
pCMV-ATG5（丰晖货号：22952）
pCMV-Beclin1（丰晖货号：24388）
pCMV-ULK1（丰晖货号：27631）
推荐：
lentiCRISPR v2（丰晖货号：BR521）
pSpCas9(BB)-2A-GFP（丰晖货号：BR080）
推荐抗体：
LC3B Polyclonal Antibody（丰晖生物，货号：Fab8383）
推荐抗体：
SQSTM1/p62 rabbit pAb（丰晖生物，货号：Fab14039）
推荐抗体：
ATG5 Rabbit Polyclonal Antibody（丰晖生物，货号：Fab1156）
推荐抗体：
ULK1 Polyclonal Antibody（丰晖生物，货号：Fab15637）
关于以上相关产品都可以在丰晖生物官网：
看完这些 “细胞清洁工” 的检测门道，你是否好奇：
自噬流紊乱究竟如何推动疾病进程？或是哪种方法最适合你的研究？
欢迎在评论区分享你的脑洞或疑问，说不定下一篇深度解析，就为你量身定制！
别忘了点赞收藏，把这份 “自噬流研究指南” 分享给实验室伙伴～
