• 产品简介

  FTLiRNA™转染试剂（FTLiRNA™ Transfection Reagent）是一种功能强大的siRNA/miRNA转染试剂，可确保多种小RNA在哺乳动物细胞中进行高效的转染，并具有高重复性。在绝大多数细胞（如HeLa，MCF7或NIH-3T3）中使用FTLiRNA™转染低浓度的siRNA，就可以达到超过90％的转染效率；对于难以转染的悬浮细胞如K562、THP-1细胞等，使用FTLiRNA™转染siRNA，也可以观察到超过80％的转染效率。

• 产品名称

  FTLiRNA™转染试剂（FTLiRNA™ Transfection Reagent）

• 产品货号

  SJ067

• 规格

  1mL

• 保存条件

  4℃保存，1年有效

转染前一天将细胞接种到相应的培养板中，以转染时细胞汇合度达到30-50%为宜，见表1。

表1. 转染前一天推荐接种的细胞数

为了提高转染效率，建议siRNA/miRNA浓度范围为10nM至100nM，FTLiRNA™用量与siRNA/miRNA浓度和培养皿规格进行匹配，见表2。

表2. 贴壁细胞推荐转染条件

将siRNA/miRNA用RNase-free H₂O配制成20uM储存液以供后续使用，配置体系见表3。

表3. 20uM siRNA/miRNA储存液的配置方法

注：1OD=2.5nmols=40ug

1. 将0.25ul 20uM的siRNA双链加入到100 ul无血清培养基或Opti-MEM中，用移液枪轻轻吹打3~5次混匀。
2. 向上述100 ul混合物中加入0.75ul的FTLiRNA™，并立即涡旋振荡10s进行混匀。
3. 室温孵育10min使双链siRNA和FTLiRNA™形成转染复合物，孵育时间不要超过30min。
4. 与此同时，吸弃培养皿中的原培养液，换成0.4 ml预热的新鲜含血清的完全培养基。
5. 将步骤3中孵育好的100 ul转染复合物加入到换液后的待转染孔中，一字法轻摇细胞板混匀。每孔中培养基的最终体积为500 ul，siRNA终浓度为10nM。
6. 转染后细胞放置于培养箱中正常培养。
7. 24~72 h后，qPCR及Western Blot检测siRNA干扰效果。

注：针对比较敏感细胞，建议转染后4-6h进行一次换液。

为了使用FTLiRNA™转染悬浮细胞取得最佳的转染效果，与常规培养条件相比，应在转染当天减少培养基体积接种细胞，可以使用半液转染法。对于不同规格的培养板，建议接种的细胞数量及完全培养基体积，见表4。

表4. 转染当天悬浮细胞接种量

针对悬浮细胞，为了达到较高的转染效率，建议使用20 nM-100nM的高siRNA/miRNA浓度范围进行转染摸索，同时适当提高转染试剂FTLiRNA™的使用量，具体各指标参考数据见表5。

表5. 悬浮细胞推荐转染条件

1. 将1.25ul 20uM的siRNA双链加入到100ul无血清培养基或Opti-MEM中，用移液枪轻轻吹打3~5次混匀。
2. 向上述100ul混合物中加入3.75ul的FTLiRNA™，并立即涡旋振荡10s进行混匀。
3. 室温孵育10min使双链siRNA和FTLiRNA™形成转染复合物，孵育时间不要超过30min。
4. 将步骤3中孵育好的100 ul转染复合物加入到150ul含血清完全培养基的细胞悬液待转染孔中，一字法轻摇细胞板混匀。每孔中培养基的最终体积为250ul，siRNA终浓度为100nM，6h后补液250ul。
5. 转染后细胞放置于培养箱中正常培养。
6. 24~72 h后，qPCR及Western Blot检测siRNA干扰效果。

注：针对比较敏感细胞，建议转染后4-6h进行一次换液。

注意事项

• 细胞转染操作需在超净工作台内进行，全程需佩戴好无菌帽、口罩和手套；
• 细胞转染用的质粒需使用无内毒素，A260/A280≈1.8的高纯度质粒DNA，丰晖生物出售的细胞转染级质粒可以满足细胞转染实验要求；
• 转染用的目的细胞需状态良好，否则转染效率会受到较大的影响；
• 细胞转染用的培养基可以使用细胞本身对应的基础培养基，也可使用减血清培养基；
• FTLiRNA™请勿反复冻融或长时间暴露于空气中，否则会影响转染效率；
• FTLiRNA™在混匀时请勿vortex或离心。

产品声明

1. 本产品仅供科研使用，不得用于临床诊断或治疗。

2. 产品使用前请仔细阅读产品说明书，按照规定的条件储存和操作。

3. 实验过程中请做好个人防护，避免直接接触。

4. 产品质量问题请在收到货后7个工作日内反馈。